แบทแมน (ให้เสียงโดย เควิน คอนรอย) และไนท์วิง (ให้เสียงโดย ลอเรน เลสเตอร์) จำต้องมาร่วมทีมกับ ฮาร์ลี่ย์ ควินน์ (ให้เสียงโดย เมลิสซา เราช์) แฟนสาวของโจ๊กเกอร์ เพื่อหยุดแผนทำลายโลกของ พอยซั่นไอวี่ (ให้เสียงโดย พาเก็ต บริวสเตอร์) สาวสารพันพิษ ที่จับมือร่วมแผนร้ายกับ เจสัน วู้ดดรู (ให้เสียงโดย เควิน ไมเคิล ริชาร์ดสัน) หรือมนุษย์ต้นไม้